《海参中海参多糖的测定 高效液相色谱法》国标征求意见

　　【仪表网 仪表标准】根据国家标准化管理委员会国家标准制修订计划，由中国标准化研究院提出并归口的《海参中海参多糖的测定 高效液相色谱法》(计划号：20205073-T-424)国家标准现已形成征求意见稿，按照《国家标准管理办法》的有关规定，现向社会各界公开征求意见。
 

　　海参(sea cucumber)，属棘皮动物门(Echinodermata)，海参纲(Holothurioider)，是棘皮动物中经济价值最大的一纲。全世界海参约有 1100 多种，我国有 100 多种，可供食用的有 20多种，其中以仿刺参的品质和口感最佳。海参含有蛋白质、多糖、微量元素和维生素等多种营养物质，已经作为功能食品而被引起关注。更重要的是，它们含有大量的生物活性物质如海参皂甙、粘多糖和胶原蛋白等，具有潜在的医药应用价值。
 

　　海参多糖作为主要的活性成分，其含量对其食用及药用价值影响很大，是不可或缺的海参营养评价指标。海参中多糖类化合物结构复杂，且因海参种类和生长环境的不同而有差别。不同种类海参中的多糖结构不同，而不同产地的同种海参中海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)和海参硫酸软骨素(SC-CHS)的含量也不尽相同。另外，海参中蛋白质、多糖、脂肪、微量元素等复杂成分的存在，会给海参多糖的测定带来很多困难，采用简单的分光光度法或称重法很难满足以海参多糖为评价指标建立海参制品质量标准的要求。因此，制订简单可信的海参多糖的检测方法标准具有十分重要的现实意义和紧迫性。
 

　　本标准规定了海参及以海参为原料加工而成的干海参、即食海参、胶囊、浆液等深加工制品中海参多糖含量的高效液相色谱测定方法的范围、规范性引用文件、原理、试剂和材料、仪器和设备、结果计算与表示、精密度。
 

　　本标准适用于海参及以海参为原料加工而成的干海参、即食海参、胶囊、浆液等深加工制品中海参多糖含量的测定。
 

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法；GB/T 8855 水果和蔬菜 取样方法。
 

　　方法原理：
 

　　样品经酶解、乙酸钾沉淀、酸解后制备得到海参硫酸软骨素水解液，水解液中岩藻糖与 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生反应，XDB-C18 色谱柱分离，经配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定岩藻糖衍生物的含量，内标法定量，以岩藻糖含量为基准计算出样品中海参多糖的含量。
 

　　仪器和设备：
 

　　1.高效液相色谱仪：配紫外检测器。2.天平：感量0.01g。3.分析天平：感量0.0001g。4.离心机：15000 r/min。5.电热恒温鼓风干燥箱。6.超声波清洗仪。7.涡旋混合器。8.恒温水浴锅。9.恒温水浴振荡器。10.氮吹仪。11.pH 计。12.微量移量移液枪及配套枪头。13.小型粉碎机。
 

　　测定步骤：
 

　　样品的前处理：
 

　　鲜海参去肠腺、灰嘴，剪成 0.5 cm×0.5 cm 的小块，70 ℃烘干 12 h，粉碎，过10目筛，混匀备用；干海参，粉碎，过 10 目筛，混匀备用；即食海参，剪成 0.5cm×0.5cm 的小块，70 ℃烘干 12 h，粉碎，过 10 目筛，混匀备用；胶囊，取内容物混匀备用；浆液，混匀备。
 

　　结果表示：
 

　　测定结果以平均测定的算术平均值表示，计算结果保留两位有效数字。两次平行测定结果的相对平均偏差不应超过10%。
 

　　本标准方法的优点在于：
 

　　(1)灵敏度高，岩藻糖衍生物在 254 nm 有很强的吸收，浓度为8.0×10-4 mg/mL 时即可实现定量检测。(2)稳定性好，24 小时内岩藻糖衍生物峰面积稳定，RSD≤5%。(3)分离效果好，在此高效液相色谱条件下，岩藻糖能够与其它单糖明显分离，有效避免其它单糖对岩藻糖的检测带来的干扰，实现准确定量。(4)适用范围较广，可应用于固态、液态等多种刺参制品中海参多糖含量的测定。(5)本方法能有效排除市场上向刺参制品中掺入其它来源多糖而干扰海参多糖准确定量的问题。